黎平县中医医院消肿止痛方体外细胞实验验证服务项目采购公告

****点击查看医院****点击查看实验室制剂建设，做好院内中药制剂研究与开发，提高中药治疗水平。现将消肿止痛方体外细胞实验验证服务项目采购公告内容如下：

一、项目名称：消肿止痛方体外细胞实验验证服务

二、招标形式:竞争性谈判

三、拦标价:23530.00元

四、采购内容：

（一）材料

1.细胞：人源巨噬细胞RAW264.7。

2.药物：消肿止痛方提物(课题组自制)。

3.试剂与仪器：DMEM培养基、胎牛血清，0.25%胰蛋白酶-乙二胺四乙酸胰酶，双抗，细胞计数试剂盒（CCK-8）,TNF- 、IL-6、IL-1 、PGE2酶联免疫吸附试验测定试剂盒，PIK3CA、PIK3CB、PIK3R1、PIK3CD抗体，酶标仪、电泳仪等。

（二）方法

1.分组与模型制备

取出RAW264.7巨噬细胞，将其加入DMEM培养基(含10%胎牛血清)中并置于5%CO2、37℃条件下传代培养。间隔1～2d更换培养液1次，待细胞完全贴壁且生长至80%时进行传代，重复传代培养操作至2～3代后，待其长满培养瓶壁形成致密单层的细胞，即可用胰蛋白酶消化液收集细胞，用于后续实验。将细胞分为正常对照组、模型组及消肿止痛方提物低、中、高剂量组。正常对照组将细胞用DMEM培养液培养，未施加任何处理因素；模型组予以脂多糖(1 g/mL),孵育24h;消肿止痛方提取物低、中、高剂量组分别予药物浸膏12.5,25,50 g/mL,孵育2h,然后加入脂多糖(1 g/mL)进行刺激，共同诱导24h。

2.检测指标与方法

消肿止痛方提取物对RAW264.7细胞活性的影响，通过CCK-8实验来评估消肿止痛方提物对细胞活性的影响，加入浓度为12.5、25、50 g/mL的消肿止痛方提物预处理2h后，再加入脂多糖(1 g/mL)共同作用，72h后用CCK-8法检测细胞的存活率。

（1）法测定细胞活性

取对数生长期RAW264.7细胞，以3 103个/孔的密度接种至96孔板中，每孔100 L细胞悬液，每株细胞每天检测3个复孔，每孔加入100 L完全培养基，放至37℃、5%CO2培养箱中继续培养，3d后加入10 LCCK8试剂，孵育30min,于酶标仪450nm测定吸光值。

（2）酶联免疫吸附试验法检测TNF- 、IL-6、IL-1 、PGE2含量

取对数生长期RAW264.7细胞，以1 104个/孔接种于96孔板，100 L/孔。细胞分组及处理同 1.2.1 项。待细胞孵育24h后收集上清液，采用酶联免疫吸附试验测定IL-6和TNF- 含量，按试剂盒说明进行操作。

（3）消肿止痛方提物对PIK3CA、PIK3CB、PIK3R1、PIK3CD蛋白表达的影响

取RAW264.7细胞接种于12孔板，分组及给药同 1.2.1 项，孵育24h后，将各组细胞板放在斜面冰上用RIPA裂解20min,离心(5010 g),移上清液，按照BCA蛋白定量结果上样。加入10%浓度的聚丙烯酰胺凝胶检测目的蛋白，再经SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDSPolyacrylamideGelElectrophoresis,SDS-PAGE)后将蛋白转至聚偏二氟乙烯(PolyvinylideneDifluoride,PVDF)膜上，5%脱脂牛奶封闭后，用相应的一抗4℃孵育过夜后，用TBST(TrisBufferedSalinewithTween20)洗2次后，再用相应的稀释好的二抗室温下孵育1～2h后，用TBST洗3次后，进行化学发光显影。

五、提供资料

1.有效资质营业执照副本复印件加盖公章；

2.法定代表人身份证复印件或授权委托书及委托人身份证复印件。

六、获取采购文件时间、地点、方式

1.获取时间：2025年7月28日8时00分至2025年7月22日17时30分。

2.获取方式:现场获取或微信、邮箱。

3.获取地址：****点击查看采购办

七、招标时间与地点:

1.时间：2025年7月31日15：00

2.地点：****点击查看

八、发布公告媒介及期限

1.媒介：****点击查看网站

2.期限：自本公告发布之日起3个工作日。（节假日除外）

九、采购联系方式、地点及期限

1.联系人: 龙尚京 联系电话：139****点击查看8545

2.地址：****点击查看采购办

3.期限时间: 2025年7月28日 ----2025年7月30日。

欢迎符合采购法第二十二条之规定的供应商报名投标

****点击查看

2025年7月28日